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　　靈芝(Ganoderma lucidum)屬于多孔菌科靈芝屬，是一種名貴的藥用真菌。靈芝中含有多種活性成分如多糖、甾類、三萜類、堿基、核苷、硬脂酸、苯甲酸、蟲漆酸、有機(jī)鍺以及多種生物堿等。靈芝有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗癌、改善血液循環(huán)，滋補(bǔ)、健腦、強(qiáng)壯、消炎、利尿等功效。我國(guó)野生靈芝資源豐富，大部分林區(qū)均有分布，據(jù)記載有90多種，分布于國(guó)內(nèi)23個(gè)省市，14種已被開發(fā)利用。隨著靈芝市場(chǎng)需求的快速增長(zhǎng)，野生靈芝資源已遭到過(guò)度采摘和破壞，有的品種已瀕臨滅絕，目前各靈芝產(chǎn)區(qū)應(yīng)加大保護(hù)力度，有序開采，嚴(yán)禁亂采亂挖以保護(hù)野生靈芝種群及生物遺傳多樣性，另外可通過(guò)對(duì)野生靈芝的引種馴化栽培和仿野生栽培等技術(shù)手段進(jìn)行合理開發(fā)利用。現(xiàn)通過(guò)多年的試驗(yàn)探索，對(duì)野生靈芝分離、純化、栽培形成完整的技術(shù)方案，供生產(chǎn)參考。

　　1 野生靈芝的菌種分離及篩選

　　1．1 培養(yǎng)基配制

　　野生靈芝組織分離采用PDA培養(yǎng)基，配方：馬鈴薯200 g，葡萄糖2O g，瓊脂2O g，水1 000 mL。將馬鈴薯切片加水煮沸30 min，4層紗布過(guò)濾后定溶至1 000 mL，在濾液中加入瓊脂、葡萄糖，分裝到18 mmX 180 rnrn試管中，121℃滅菌0．5 h后擺斜面。

　　1．2 野生靈芝的組織分離

　　選取野外采摘的幼嫩靈芝子實(shí)體用無(wú)菌水清洗表面，然后用75 酒精棉球進(jìn)行表面消毒，在超凈工作臺(tái)內(nèi)(如無(wú)超凈臺(tái)可在自制的簡(jiǎn)易接種箱內(nèi))用滅菌的手術(shù)刀將靈芝菌蓋從中間分開，將菌蓋內(nèi)部菌肉分割成5 mm見(jiàn)方的小塊，用滅菌的鑷子將菌塊接種到PDA斜面培養(yǎng)基上。接種后放入25~C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

　　1．3 菌種篩選

　　分離接種3～5 d后可見(jiàn)菌塊周圍長(zhǎng)出白色菌絲并開始在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)，去除雜菌污染的試管，10～15 d后可長(zhǎng)滿試管斜面。篩選出菌絲潔白濃密、氣生菌絲多的試管進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

　　1．4 菌種繼代培養(yǎng)

　　繼代培養(yǎng)可采用PDA培養(yǎng)基和棉籽殼培養(yǎng)基。棉籽殼培養(yǎng)基配方 為：棉籽殼100 g，麥麩10 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，將棉籽殼、麥麩文火煮50 min，4層紗布過(guò)濾后定溶至1 000 mL，其它步驟同PDA培養(yǎng)基。將篩選出的分離菌種無(wú)菌分割成5 mmX7 mm菌塊接種到繼代培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)7～10 d可長(zhǎng)滿試管斜面，如此繼代培養(yǎng)2～3次，每次都去除雜菌污染的菌種，篩選出長(zhǎng)勢(shì)好的菌種，可作為栽培用的母種。

　　2 引種的野生靈芝栽培試驗(yàn)

　　菌種分離成功后為鑒定菌種純度及驗(yàn)證是否具有出芝能力，需要進(jìn)行出芝試驗(yàn)，并且通過(guò)試驗(yàn)篩選出產(chǎn)量高、抗病抗雜能力強(qiáng)的菌株。

　　2．1 原種及栽培種的制作

　　2．1．1 原種及栽培種配方①棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼78 ，麥麩2O ，蔗糖1 ，石膏1％。②木屑培養(yǎng)基：闊葉木屑78 ，麥麩2O ，蔗糖1％ ，石膏1 。③ 玉米粒培養(yǎng)基：玉米粒97 ，蔗糖1 ，石膏l(xiāng) ，碳酸鈣1 。④麥粒培養(yǎng)基：麥粒97 ，蔗糖1 ，石膏1 ，碳酸鈣1 。

　　2．1．2 原種的制作及接種配方①、② 的制作方法：將培養(yǎng)料混勻，按料：水一1：1．5加水拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121℃滅菌1．5 h。配方③ 、④ 的制作方法：分別將玉米粒和麥粒煮至無(wú)白心撈出稍晾干后加入其它材料拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121℃滅菌1．5 h。原種瓶滅菌冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接人靈芝母種，25"C恒溫培養(yǎng)30~40 d可長(zhǎng)滿瓶。

　　2．1．3 栽培種制作如果大規(guī)模栽培要制作栽培種，小規(guī)模栽培可直接用原種接種，栽培種可用33 cmX 17 cmX0．05 cm的聚丙烯塑料袋，制作同原種，121"C滅菌2 h，冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接人原種，25~C恒溫培養(yǎng)40 d可長(zhǎng)滿袋。

　　2．2 栽培袋的制作

　　2．2．1 栽培料配方①棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼83 ，麥麩15 ，蔗糖1 ，石膏1 。② 木屑培養(yǎng)基：闊葉木屑83 ，麥麩15 ，蔗糖1 ，石膏1 。③棉籽殼木屑培養(yǎng)基：棉籽殼45％，闊葉木屑38 ，麥麩15 ，蔗糖1％，石膏1 。④段木培養(yǎng)基：將直徑10 cm的闊葉樹干截成30 cm的木段。

　　2．2．2 栽培料培養(yǎng)基配制及接種①②③拌料同原種，配制后裝入33 cmX17 cmX0．05 cm的聚丙烯栽培袋，每袋裝折合干料500 g左右。④用水浸泡后裝入聚丙烯袋。121℃滅菌2 h，冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入原種或栽培種，25℃恒溫培養(yǎng)30~45 d可長(zhǎng)滿袋。

　　2．3 出芝試驗(yàn)

　　2．3．1 出芝條件及方法菌絲滿袋后轉(zhuǎn)入菇房出芝，菇房可選擇日光溫室、塑料大棚或半地下式拱棚。出芝溫度控制在25~30℃，空氣濕度80 ～9O ，要有遮光設(shè)施，光照控制在三分陽(yáng)七分陰，定時(shí)通風(fēng)。出芝方式可采用直接開袋出芝和開袋覆土出芝2種方法。直接開袋出芝是菌袋移入菇房后結(jié)開扎袋口繩，留少許縫隙，當(dāng)有原基出現(xiàn)后逐漸結(jié)開袋口，可順利出芝，缺點(diǎn)是菌棒容易失水，補(bǔ)水困難。覆土法是在菇房?jī)?nèi)開挖3 mX0．8 1XI×0．5 in的畦，將菌袋脫去袋膜豎直放入，菌棒間留3～5 cm間隙，用含腐殖質(zhì)的園田土填實(shí)，澆透水后覆3 cm細(xì)土，10~20 d后可出芝。

　　2．3．2 菌株的篩選栽培出芝后篩選出生長(zhǎng)快、抗污染能力強(qiáng)、產(chǎn)量高的菌株作為推廣栽培的品種。還可以根據(jù)不同的應(yīng)用目的進(jìn)行篩選。如作為藥材食用可選擇產(chǎn)量高菌蓋大菌肉厚的菌株；如制作盆景可選擇菌柄長(zhǎng)菌蓋形狀和顏色好的菌株；如以采收孢子為目的可選擇產(chǎn)孢量大的菌株。對(duì)篩選出的菌株再進(jìn)行2～3次栽培試驗(yàn)以確定性狀的穩(wěn)定性后可推廣生產(chǎn)。

　　3 引種的野生靈芝菌種復(fù)壯

　　菌種長(zhǎng)期保存后生活能力下降，影響質(zhì)量和產(chǎn)量。為了確保菌種的優(yōu)良性狀和較強(qiáng)的適應(yīng)能力，要進(jìn)行復(fù)壯。

　　3．1 低溫保藏菌種及時(shí)轉(zhuǎn)管

　　菌種放在4℃冰箱中保藏，使菌種處于較低的生命活動(dòng)水平，每隔4個(gè)月轉(zhuǎn)管1次，轉(zhuǎn)管后再繼續(xù)低溫保藏或使用。轉(zhuǎn)管時(shí)可經(jīng)常更換培養(yǎng)基配方，適時(shí)變換培養(yǎng)基成分和比例，既可增強(qiáng)菌種活力，促進(jìn)良種復(fù)壯，又可提高菌種成活率，提高產(chǎn)量。

　　3．2 組織分離提純復(fù)壯法

　　繼代保藏的菌種轉(zhuǎn)管超過(guò)6次以上會(huì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象，可在栽培中選擇性狀穩(wěn)定、抗雜菌能力強(qiáng)、產(chǎn)量高的菌株進(jìn)行組織分離，以達(dá)到長(zhǎng)期保藏菌種的目的。

　　3．3 孢子分離提純復(fù)壯法

　　選取即將產(chǎn)孢子的子實(shí)體一小塊菌褶朝下用鐵絲懸于無(wú)菌三角瓶口，孢子彈射后用無(wú)菌水稀釋，接種到PDA平板上培養(yǎng)，孢子萌發(fā)后挑取單孢子初生菌絲在PDA平板上進(jìn)行配對(duì)，選取親和交配型，經(jīng)檢驗(yàn)為雙核菌絲的，移接試管中成為母種。再進(jìn)行栽培試驗(yàn)篩出性狀穩(wěn)定的菌株。

　　4 靈芝的仿野生栽培

　　仿野生栽培是將培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)好菌的栽培袋在自然條件下利用山問(wèn)林地進(jìn)行人工栽培出芝，其產(chǎn)品具有野生靈芝的外觀和顏色，由于是從野外分離的菌種更適合當(dāng)?shù)氐臍夂颦h(huán)境因此可獲得高產(chǎn)，并且會(huì)積累更多的干物質(zhì)，提高藥用活性成分的含量。

　　4．1 菌袋的制作和培養(yǎng)

　　培養(yǎng)料及菌袋制作、發(fā)菌培養(yǎng)同栽培試驗(yàn)。

　　4．2 栽培方法

　　栽培季節(jié)選擇5～7月份溫度穩(wěn)定在25~3o~C時(shí)進(jìn)行。栽培場(chǎng)地要求排水通風(fēng)良好，光照為三分陽(yáng)七分陰的林下。開挖3 mX0．8 mX0．5 m的畦，將發(fā)好菌的菌棒脫去袋豎直放入畦內(nèi)，菌棒間留3～5 cm間隙，用土填實(shí)，澆透水后覆3 cm細(xì)土，畦上搭建塑料小拱棚以利于保溫保濕，光照強(qiáng)時(shí)可用遮陽(yáng)網(wǎng)覆蓋。管理時(shí)注意保持好溫度、濕度并及時(shí)通風(fēng)，10～20 d可出現(xiàn)原基，再過(guò)20 d左右菌蓋完全展開時(shí)采收。

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